तरल क्रोमैटोग्राफी द्वारा मात्रात्मक विश्लेषणको सिद्धान्त र विधिहरू

तरल क्रोमेटोग्राफी को विभाजन संयन्त्र दुई चरणहरु को लागि मिश्रण मा घटक को सम्बन्ध मा भिन्नता मा आधारित छ।

विभिन्न स्थिर चरणहरू अनुसार, तरल क्रोमाटोग्राफीलाई तरल-ठोस क्रोमाटोग्राफी, तरल-तरल क्रोमाटोग्राफी र बन्डेड चरण क्रोमाटोग्राफीमा विभाजन गरिएको छ।फिलरको रूपमा सिलिका जेलको साथ तरल-ठोस क्रोमाटोग्राफी र म्याट्रिक्सको रूपमा माइक्रोसिलिकाको साथ बन्डेड चरण क्रोमाटोग्राफी सबैभन्दा व्यापक रूपमा प्रयोग गरिन्छ।

स्थिर चरणको रूप अनुसार, तरल क्रोमाटोग्राफीलाई स्तम्भ क्रोमाटोग्राफी, पेपर क्रोमाटोग्राफी र पातलो तह क्रोमाटोग्राफीमा विभाजन गर्न सकिन्छ।सोखन क्षमता अनुसार, यो सोखना क्रोमैटोग्राफी, विभाजन क्रोमाटोग्राफी, आयन विनिमय क्रोमैटोग्राफी र जेल पारी क्रोमाटोग्राफी मा विभाजित गर्न सकिन्छ।

हालैका वर्षहरूमा, तरल स्तम्भ क्रोमाटोग्राफी प्रणालीमा उच्च-दबाव तरल प्रवाह प्रणाली जोडिएको छ जसले मोबाइल चरणलाई उच्च दबावमा छिटो प्रवाह गर्न पृथक प्रभाव सुधार गर्न मद्दत गर्दछ, त्यसैले उच्च-दक्षता (उच्च-दबाव पनि भनिन्छ) तरल क्रोमेटोग्राफी। उदय भएको छ।

भाग
01 तरल क्रोमैटोग्राफी को मात्रात्मक विश्लेषण को सिद्धान्त

गुणात्मक आधारमा परिमाण गर्न, शुद्ध पदार्थहरू मापदण्डको रूपमा आवश्यक छ;

तरल क्रोमेटोग्राफी परिमाणीकरण एक अपेक्षाकृत मात्रात्मक विधि हो: अर्थात्, मिश्रणमा विश्लेषकको मात्रा शुद्ध मानक नमूनाको ज्ञात मात्राबाट अनुमान गरिएको छ।

भाग
02 तरल क्रोमेटोग्राफी द्वारा परिमाणीकरण को आधार

मापन गरिएको कम्पोनेन्ट (W) को मात्रा प्रतिक्रिया मान (A) (चरम उचाइ वा शिखर क्षेत्र), W=f×A सँग समानुपातिक छ।

मात्रात्मक सुधार कारक (f): यो मात्रात्मक गणना सूत्रको समानुपातिक स्थिरता हो, र यसको भौतिक अर्थ एकाइ प्रतिक्रिया मान (चरम क्षेत्र) द्वारा प्रतिनिधित्व गरिएको मापन घटकको मात्रा हो।

मात्रात्मक सुधार कारक मानक नमूना र यसको प्रतिक्रिया मूल्य को ज्ञात मात्रा बाट प्राप्त गर्न सकिन्छ।

अज्ञात कम्पोनेन्टको प्रतिक्रिया मान नाप्नुहोस्, र कम्पोनेन्टको मात्रा मात्रात्मक सुधार कारकद्वारा प्राप्त गर्न सकिन्छ।

भाग
03 मात्रात्मक विश्लेषणमा सामान्य शब्दहरू

नमूना (नमूना): क्रोमेटोग्राफिक विश्लेषणको लागि एक विश्लेषक समावेश भएको समाधान।मानक र अज्ञात नमूनाहरूमा विभाजित।

मानक: ज्ञात एकाग्रता संग एक शुद्ध उत्पादन।अज्ञात नमूना (अज्ञात): मिश्रण जसको एकाग्रता परीक्षण गरिनु पर्छ।

नमूना वजन: नमूनाको मूल तौल परीक्षण गर्न।

Dilution: अज्ञात नमूना को कमजोरी कारक।

कम्पोनेन्ट: मात्रात्मक रूपमा विश्लेषण गरिनु पर्ने क्रोमेटोग्राफिक शिखर, अर्थात् विश्लेषक जसको सामग्री अज्ञात छ।

कम्पोनेन्टको मात्रा (राशि): परीक्षण गरिने पदार्थको सामग्री (वा एकाग्रता)।

पूर्णता: कम्प्युटर द्वारा क्रोमेटोग्राफिक शिखरको शिखर क्षेत्र मापन गर्ने कम्प्यूटेशनल प्रक्रिया।

क्यालिब्रेसन कर्भ: कम्पोनेन्ट सामग्री बनाम प्रतिक्रिया मानको रेखीय वक्र, मानक पदार्थको ज्ञात मात्राबाट स्थापित, विश्लेषकको अज्ञात सामग्री निर्धारण गर्न प्रयोग गरिन्छ।

भाग
04 तरल क्रोमैटोग्राफी को मात्रात्मक विश्लेषण

1. मात्रात्मक विश्लेषणको लागि उपयुक्त क्रोमेटोग्राफिक विधि चयन गर्नुहोस्:

l पत्ता लगाइएको घटकको शिखर पुष्टि गर्नुहोस् र 1.5 भन्दा ठूलो रिजोल्युसन (R) प्राप्त गर्नुहोस्।

l परीक्षण गरिएका अवयवहरूको क्रोमेटोग्राफिक शिखरहरूको स्थिरता (शुद्धता) निर्धारण गर्नुहोस्

l विधिको पत्ता लगाउने सीमा र परिमाणीकरण सीमा निर्धारण गर्नुहोस्;संवेदनशीलता र रैखिक दायरा

2. विभिन्न सांद्रताको मानक नमूनाहरूको साथ क्यालिब्रेसन वक्र स्थापना गर्नुहोस्

3. मात्रात्मक विधिहरूको शुद्धता र परिशुद्धता जाँच गर्नुहोस्

4. नमूना सङ्कलन, डाटा प्रशोधन र रिपोर्ट परिणामहरू लागू गर्न सम्बन्धित क्रोमेटोग्राफी व्यवस्थापन सफ्टवेयर प्रयोग गर्नुहोस्

भाग
05 मात्रात्मक शिखरहरूको पहिचान (गुणात्मक)

गुणात्मक रूपमा प्रत्येक क्रोमेटोग्राफिक शिखरलाई परिमाणित गर्न पहिचान गर्नुहोस्

पहिले, क्रोमेटोग्राफिक शिखरको अवधारण समय (Rt) निर्धारण गर्न मानक नमूना प्रयोग गर्नुहोस्।अवधारण समयको तुलना गरेर, अज्ञात नमूनामा प्रत्येक क्रोमेटोग्राफिक शिखरसँग सम्बन्धित घटक फेला पार्नुहोस्।क्रोमेटोग्राफिक गुणात्मक विधि भनेको प्रतिधारण समयलाई मानक नमूनासँग तुलना गर्नु हो।मापदण्ड अपर्याप्तथप पुष्टिकरण (गुणात्मक)

1. मानक थप विधि

2. एकै समयमा अन्य विधिहरू प्रयोग गर्नुहोस्: अन्य क्रोमेटोग्राफिक विधिहरू (संयन्त्र परिवर्तन गर्नुहोस्, जस्तै: विभिन्न क्रोमेटोग्राफिक स्तम्भहरू प्रयोग गरेर), अन्य डिटेक्टरहरू (PDA: स्पेक्ट्रम तुलना, स्पेक्ट्रम पुस्तकालय खोज; MS: मास स्पेक्ट्रम विश्लेषण, स्पेक्ट्रम पुस्तकालय खोज)

3. अन्य उपकरण र विधिहरू

भाग
06 मात्रात्मक शिखर स्थिरता को पुष्टि

क्रोमेटोग्राफिक शिखर स्थिरता (शुद्धता) पुष्टि गर्नुहोस्

सुनिश्चित गर्नुहोस् कि प्रत्येक क्रोमेटोग्राफिक शिखर अन्तर्गत एक मात्र मापन घटक छ

सह-इल्युटिंग पदार्थ (अशुद्धता) बाट हस्तक्षेपको लागि जाँच गर्नुहोस्

क्रोमेटोग्राफिक पीक स्थिरता (शुद्धता) को पुष्टिका लागि विधिहरू

फोटोडियोड म्याट्रिक्स (PDA) डिटेक्टरहरूसँग स्पेक्ट्रोग्राम तुलना गर्दै

शिखर शुद्धता पहिचान

2996 शुद्धता कोण सिद्धान्त

भाग ०७ मा सामान्यतया प्रयोग हुने मात्रात्मक विधिहरू

मानक वक्र विधि, बाह्य मानक विधि र आन्तरिक मानक विधिमा विभाजित:

1. बाह्य मानक विधि: तरल क्रोमेटोग्राफीमा सबैभन्दा धेरै प्रयोग गरिन्छ

ज्ञात सांद्रताको मानक नमूनाहरूको एक श्रृंखला मानक नमूनाहरूको रूपमा परीक्षण गर्न यौगिकहरूको शुद्ध नमूनाहरू प्रयोग गरेर तयार गरिएको थियो।स्तम्भमा यसको प्रतिक्रिया मान (चरम क्षेत्र) सम्म इन्जेक्ट गरियो।
एक निश्चित दायरा भित्र, मानक नमूनाको एकाग्रता र प्रतिक्रिया मान, अर्थात् W= f×A, र एक मानक वक्र बनाइएको बीचमा राम्रो रैखिक सम्बन्ध हुन्छ।

ठ्याक्कै उही प्रयोगात्मक अवस्थाहरू अन्तर्गत, मापन गर्नुपर्ने घटकको प्रतिक्रिया मान प्राप्त गर्न अज्ञात नमूनालाई इन्जेक्ट गर्नुहोस्।ज्ञात गुणांक f अनुसार, नाप्नु पर्ने घटकको एकाग्रता प्राप्त गर्न सकिन्छ।

बाह्य मानक विधि को लाभ:सरल सञ्चालन र गणना, यो एक सामान्य रूपमा प्रयोग मात्रात्मक विधि हो;प्रत्येक घटक पत्ता लगाउन र eluted को लागी आवश्यक छैन;मानक नमूना आवश्यक छ;मानक नमूना र अज्ञात नमूनाको मापन सर्तहरू अनुरूप हुनुपर्छ;इंजेक्शन भोल्युम सटीक हुनुपर्छ।

बाह्य मानक विधि को हानि:प्रयोगात्मक अवस्थाहरू उच्च हुन आवश्यक छ, जस्तै डिटेक्टरको संवेदनशीलता, प्रवाह दर, र मोबाइल चरणको संरचना परिवर्तन गर्न सकिँदैन;प्रत्येक इंजेक्शन को भोल्युम राम्रो दोहोरिने योग्यता हुनुपर्छ।

2. आन्तरिक मानक विधि: सही, तर कष्टप्रद, मानक विधिहरूमा सबैभन्दा धेरै प्रयोग गरिन्छ

मिश्रित मानक बनाउन मानकमा आन्तरिक मानकको ज्ञात मात्रा थपिन्छ, र ज्ञात एकाग्रताको कार्य स्तरहरूको श्रृंखला तयार गरिन्छ।मिश्रित मानकमा मानक र आन्तरिक मानकको दाढ़ अनुपात अपरिवर्तित रहन्छ।क्रोमेटोग्राफिक स्तम्भमा इन्जेक्सन गर्नुहोस् र प्रतिक्रिया मानको रूपमा (मानक नमूना शिखर क्षेत्र/आन्तरिक मानक नमूना शिखर क्षेत्र) लिनुहोस्।प्रतिक्रिया मूल्य र कार्य मानक को एकाग्रता बीचको रैखिक सम्बन्ध अनुसार, अर्थात् W = f × A, एक मानक वक्र बनाइन्छ।

अज्ञात नमूनामा आन्तरिक मानकको ज्ञात मात्रा थपिएको छ र मापन गर्नुपर्ने घटकको प्रतिक्रिया मूल्य प्राप्त गर्न स्तम्भमा इन्जेक्ट गरिएको छ।ज्ञात गुणांक f अनुसार, नाप्नु पर्ने घटकको एकाग्रता प्राप्त गर्न सकिन्छ।

आन्तरिक मानक विधि को विशेषताहरु:सञ्चालनको क्रममा, नमूना र आन्तरिक मापदण्ड सँगै मिसाइन्छ र क्रोमेटोग्राफिक स्तम्भमा इन्जेक्सन गरिन्छ, त्यसैले जबसम्म मिश्रित समाधानमा आन्तरिक मानकमा मापन गरिएको घटकको मात्रा स्थिर रहन्छ, नमूनाको मात्रा परिवर्तन हुन्छ। मात्रात्मक परिणामलाई असर गर्दैन।।आन्तरिक मानक विधिले नमूना भोल्युम, र मोबाइल चरण र डिटेक्टरको प्रभावलाई अफसेट गर्दछ, त्यसैले यो बाह्य मानक विधि भन्दा बढी सही छ।

भाग
08 मात्रात्मक विश्लेषण परिणामहरूलाई असर गर्ने कारकहरू

खराब शुद्धता निम्न कारणले हुन सक्छ:

गलत शिखर क्षेत्र एकीकरण, नमूना विघटन वा अशुद्धता नमूना तयारीको क्रममा परिचय, नमूना शीशी सिल नगरिएको, नमूना वा विलायक वाष्पीकरण, गलत नमूना तयारी, नमूना इंजेक्शन समस्याहरू, गलत आन्तरिक मानक तयारी

खराब परिशुद्धताको सम्भावित कारणहरू:

गलत शिखर एकीकरण, इंजेक्शन वा इन्जेक्टर समस्याहरू, नमूना विघटन वा अशुद्धता नमूना तयारीको क्रममा परिचय, क्रोमेटोग्राफिक समस्याहरू, डिग्रेडेड डिटेक्टर प्रतिक्रिया